慢病毒
慢病毒
慢病毒属于一类缓慢病毒，潜伏期长（数月甚至数年），且具有诱导多种病理特征的倾向。由于其基因组相当灵活且具备转导多种非分裂细胞的潜力，慢病毒已成为最广泛使用的基因转移载体之一。
| 核心优势 | 具体说明 |
|---|---|
| 宿主细胞范围广 | 能感染分裂细胞+非分裂细胞(如神经元、巨噬细胞、干细胞等)，普通逆转录病毒载体仅能感染分裂细胞，这让慢病毒载体可用于更多类型的细胞实验/治疗。 |
| 可稳定整合基因 | 将目的基因逆转录为DNA后，整合到宿主细胞基因组，实现目的基因的长期、稳定表达(非瞬时表达)，适合长期实验或基因治疗(如遗传病、肿瘤的长期干预)。 |
| 安全性较高(经改造后) | 常用的慢病毒载体是复制缺陷型(缺失了HIV的关键致病基因)，仅能完成"递送基因"，无法在宿主细胞中自主复制，大幅降低了感染风险。 |
| 装载容量较大 | 可容纳8-10kb的外源基因片段，比腺相关病毒(AAV，通常<5kb)的装载能力更强，能携带更大的目的基因(如较大的治疗性基因)。 |
| 免疫原性低 | 经改造后的慢病毒载体在体内引发的免疫反应较弱，适合用于体内实验或临床治疗(减少免疫排斥对效果的影响)。 |
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病毒载体包装工作流程
基因合成
亚克隆
质粒制备
病毒包装
离心
质量控制
交货
运输/储存
我们的慢病毒存储在HBSS缓冲液中，并采用干冰运输。收到慢病毒后，立即放置于-80℃，长期贮存至少6个月。慢病毒的保质期约为一年。请避免反复冻融，因为这会导致慢病毒滴度大幅下降。
生产/质控
在我们的第三代慢病毒包装系统中，携带目的基因（GOI）的转移质粒与我们专有的VSV-G包膜质粒、以及编码Gag/Pol和Rev的包装质粒共同转染至HEK293T包装细胞。
经过48小时培养后，收集上清液并通过离心去除细胞碎片，随后进行过滤处理。慢病毒颗粒随后采用聚乙二醇（PEG）法进行浓缩。对于超纯化慢病毒（体内应用级别），
病毒颗粒还需经过蔗糖梯度超速离心进一步纯化，并通过超滤法进行浓缩。我们采用p24 ELISA法测定慢病毒滴度。
对于我们生产的每一个重组慢病毒，其质量控制包括滴度测定、细菌和真菌/无菌检测以及支原体检测。如果转移载体编码荧光蛋白，
我们将进行转导测试以检测相应的荧光信号；若转移载体编码药物筛选标记，则会在转导测试后实施相应的药物筛选。
此外，对于超纯化慢病毒，我们会例行检测内毒素水平。如果您需要该结果呈现在相应的COA文件上，我们将收取一定额外费用。其它质量控制服务可根据需求提供。
FAQs
1、慢病毒载体与其他病毒载体相比有什么特点?
| 慢病毒 | MMLV | 腺病毒 | AAV | |
|---|---|---|---|---|
| 组织嗜性 | 广泛 | 广泛 | hAd5只感染表达CAR受体的细胞 | 取决于血清型 |
| 是否可感染非分裂细胞 | 是 | 否 | 是 | 是 |
| 病毒基因组稳定整合抑或游离于宿主基因组 | 稳定整合 | 稳定整合 | 游离的DNA附加体形式 | 游离的DNA附加体形式 |
| 自定义启动子 | 是 | 否 | 是 | 是 |
| 应用 | 细胞培养和体内实验 | 细胞培养和体内实验 | 体内实验 | 体内实验 |
| 体内免疫反应 | 低 | 低 | 高 | 非常低 |
2、慢病毒滴度是如何测定的?
我们使用p24 ELISA法测定慢病毒滴度。该方法的三明治免疫试验可测定HIV-1 核心蛋白p24在慢病毒上清液中的含量水平。我们首先在微量滴定板上加入慢病毒样本，然后每孔加入HIV-1 p24捕获抗体进行孵育，
并随后添加生物素化的p24二抗以结合p24一抗。此后，样本中加入的辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素可特异性结合生物素化的p24二抗。
在最后一步中，加入辣根过氧化物酶底物反应液，经HRP催化产生有颜色的产物。每个孔的颜色深度最终反映了慢病毒样本中的p24含量。
使用分光光度计测量的样本吸光度数值与重组HIV-1的 p24标准曲线进行对照，然后被换算为对应的慢病毒滴度。
3、如何测量慢病毒基因组的长度?
野生型慢病毒HIV-1的基因组长度约为9.2 kb，这也是重组慢病毒载体的承载限度范围。载体上能包装进病毒的区域长度为从5’ LTR的R元件的第一个碱基到3’ LTR的R元件的最后一个碱基。超出承载量的片段插入则会造成病毒包装滴度降低。
