| 描述及优势 | PolyFast 转染试剂采用非脂质体阳离子聚合物为主要成分，适用于 DNA、RNA 的转染。其具体原理为外源 DNA、RNA 可以与转染试剂形成稳定复合物，通过胞吞作用进入细胞，随后在胞质中释放。PolyFast 转染试剂对多种常见细胞具有高水平转染效率，对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果，高效低毒、操作简便、重复性好. |
| 储存条件 & 期限 | -20°C，2 年。避免反复冻融 |
| 操作流程 | 1. 准备待转染细胞（以 6 孔板为例） 1.1 提前一天接种细胞，至细胞密度达到 70-90% 进行细胞转染。 注：细胞状态会极大影响转染效率，待转染细胞应处于良好生长状态，建议使用生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染。 1.2 吸去原培养基，用 1× PBS 洗涤细胞 2-3 次，加入 900 μL 新鲜无血清培养基。 2. 准备转染试剂/DNA 复合物 2.1 参照表 1 （见说明书）对 PolyFast 转染试剂进行稀释，对于待转染 6 孔板中的每孔细胞，取 50 μL 无血清培养基与 3 μL PolyFast 转染试剂混合，用枪轻轻吹打混匀，室温反应 5 分钟。 2.2 参照表 1 （见说明书）对 DNA 进行稀释，对于待转染 6 孔板中的每孔细胞，取 50 μL 无血清培养基与 1 μg DNA 混合，用枪轻轻吹打混匀，室温反应 5 分钟。 2.3 将上述稀释好的 PolyFast 转染试剂与 DNA 轻轻混匀，得到 PolyFast 转染试剂/DNA 复合物，室温孵育 15 分钟。 3. 加入 PolyFast 转染试剂/DNA 复合物至细胞 将上述 PolyFast 转染试剂/DNA 复合物加入每孔细胞（复合物占每孔总体积约 1/10），轻轻混匀后于 37℃ 孵育 24-48 小时。必要时，可在转染 6 小时后更换新鲜有血清培养基。 注：1) 通常情况下，DNA (μg) 和 PolyFast 转染试剂 (μL) 的用量比例为 1:3。如有必要，可在 1:1-1:5 的范围内调整以优化转染效果。最佳转染条件因不同的细胞类型和培养条件而有所区别，转染前，可做预实验摸索最佳转染比例。 2) RNA 转染操作可参考 DNA 转染方法进行。 4. 分析转染细胞 转染细胞培养 24-48 小时后，可根据实际情况用荧光检测法、Western Blot、ELISA 等检测转染效果，或加入筛选药物进行稳定细胞株的筛选。 |
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| 描述及优势 | PolyFast 转染试剂采用非脂质体阳离子聚合物为主要成分，适用于 DNA、RNA 的转染。其具体原理为外源 DNA、RNA 可以与转染试剂形成稳定复合物，通过胞吞作用进入细胞，随后在胞质中释放。PolyFast 转染试剂对多种常见细胞具有高水平转染效率，对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果，高效低毒、操作简便、重复性好. |
| 储存条件 & 期限 | -20°C，2 年。避免反复冻融 |
| 操作流程 | 1. 准备待转染细胞（以 6 孔板为例） 1.1 提前一天接种细胞，至细胞密度达到 70-90% 进行细胞转染。 注：细胞状态会极大影响转染效率，待转染细胞应处于良好生长状态，建议使用生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染。 1.2 吸去原培养基，用 1× PBS 洗涤细胞 2-3 次，加入 900 μL 新鲜无血清培养基。 2. 准备转染试剂/DNA 复合物 2.1 参照表 1 （见说明书）对 PolyFast 转染试剂进行稀释，对于待转染 6 孔板中的每孔细胞，取 50 μL 无血清培养基与 3 μL PolyFast 转染试剂混合，用枪轻轻吹打混匀，室温反应 5 分钟。 2.2 参照表 1 （见说明书）对 DNA 进行稀释，对于待转染 6 孔板中的每孔细胞，取 50 μL 无血清培养基与 1 μg DNA 混合，用枪轻轻吹打混匀，室温反应 5 分钟。 2.3 将上述稀释好的 PolyFast 转染试剂与 DNA 轻轻混匀，得到 PolyFast 转染试剂/DNA 复合物，室温孵育 15 分钟。 3. 加入 PolyFast 转染试剂/DNA 复合物至细胞 将上述 PolyFast 转染试剂/DNA 复合物加入每孔细胞（复合物占每孔总体积约 1/10），轻轻混匀后于 37℃ 孵育 24-48 小时。必要时，可在转染 6 小时后更换新鲜有血清培养基。 注：1) 通常情况下，DNA (μg) 和 PolyFast 转染试剂 (μL) 的用量比例为 1:3。如有必要，可在 1:1-1:5 的范围内调整以优化转染效果。最佳转染条件因不同的细胞类型和培养条件而有所区别，转染前，可做预实验摸索最佳转染比例。 2) RNA 转染操作可参考 DNA 转染方法进行。 4. 分析转染细胞 转染细胞培养 24-48 小时后，可根据实际情况用荧光检测法、Western Blot、ELISA 等检测转染效果，或加入筛选药物进行稳定细胞株的筛选。 |
