双链 RNA（dsRNA）是绿色 RNA 农药核心原料，化学合成、体外转录成本高昂，微生物工程菌发酵是低成本规模化主流路线，现有多类底盘菌株与系统改造策略。
一、主流底盘菌株
1. 大肠杆菌：遗传工具完善，经典 HT115 (DE3) 敲除 rnc/rnd/rne 降解酶；BL21 (DE3)Δrnc 产量更高，适配实验室小规模制备。
2. 谷氨酸棒杆菌：工业化潜力最强，搭配高拷贝 T7 载体、U1A 保护蛋白，0.3L 发酵罐 dsRNA 可达 1.0 g/L，可合成长片段 dsRNA。
3. 其他底盘：苏云金芽孢杆菌依托产孢强启动子，发酵后期菌体自溶简化提取；丁香假单胞菌借助 φ6 噬菌体 RdRp 酶合成超长 dsRNA；酵母、昆虫共生菌适用于特殊递送场景，但产量偏低。
二、核心菌株改造技术
1. 宿主基因组编辑：敲除 rnc、rnt1 等 RNA 降解基因，缺失 endA、recA 提升质粒稳定性。
2. 表达载体优化：采用双向启动子 / 发夹环两种转录框架；选用 T7、ProD 强启动子，串联高效终止子；提升质粒拷贝数。
3. 产物保护改造：共表达 U1A、TriMV P1 等 RNA 结合蛋白，减少胞内降解。
4. 发酵调控改造：优化诱导体系（乳糖替代 IPTG、光控 / 温控启动子），平衡菌体量与 dsRNA 积累峰值。
三、现存问题与展望
当前多数菌株产量仍难满足大规模农药需求，后续可通过代谢重分配、适应性进化、基因组精简改造，进一步降低 dsRNA 生产成本，推动 RNA 农药产业化。
文献来源：
崔锦程,崔洁,卞小莹. 生产双链RNA工程菌的研究进展[J]. 生物工程学报, 2025, 41(2): 546-558
原文链接：https://cjb.ijournals.cn/cjbcn/article/abstract/05240571
